エンテカビル
C12H15N5O3・H2O 295.29
6H-プリン-6-オン、2-アミノ-1,9-ジヒドロ-9-[(1S,3R,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]-、一水和物;
9-[(1S,3R,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン一水和物 [209216-23-9]; UNI: 5968Y6H45M。
無水 277.28
定義
エンテカビルは一水和物で、無水ベースで計算すると、NLT 98%、NMT 102% のエンテカビル (C12H15N5O3) が含まれています。
識別
読み替えてください:
• A. 分光識別テスト<197>、赤外分光法: 197A または 197K (CN 1-May-2020)
• B. サンプル溶液の主要ピークの保持時間は、アッセイで得られた標準溶液の保持時間に対応します。
アッセイ
• 手順
溶液 A: アセトニトリルと水 (3:97)
溶液 B: アセトニトリル
移動相: 表 1 を参照してください。勾配溶出時間は、滞留容量約 1.0 mL の HPLC システムで確立されます。]
表 1 時間 (分) 溶液 A (%) 溶液 B (%)
0 100 0
8 100 0
50 77 23
75 17 83
90 100 0
100 100 0
システム適合性ストック溶液: メタノール中の USP エンテカビル システム適合性混合物 RS 1.0 mg/mL
システム適合性溶液: システム適合性原液からの溶液 A 中の USP エンテカビル システム適合性混合物 RS 0.2 mg/mL
標準原液: メタノール中の USP エンテカビル一水和物 RS 1.0 mg/mL。必要に応じて超音波処理します。
標準溶液: 標準原液からの溶液 A 中の USP エンテカビル一水和物 RS 0.2 mg/mL
サンプル原液: メタノール中のエンテカビル 1.0 mg/mL。必要に応じて超音波処理します。
サンプル溶液: サンプル原液からの溶液 A 中のエンテカビル 0.2 mg/mL
クロマトグラフシステム
(クロマトグラフィー<621>、システムの適合性を参照。)
モード: LC
検出器: UV 254 nm
カラム: 4.6-mm × 25-cm; 5-µm パッキング L1
流量: 1 mL/分
注入量：10μL
システム適合性
サンプル：システム適合性溶液と標準溶液
[ 注-システム適合性ソリューション内の成分の相対的な保持時間については、表 2 を参照してください。]
適合性要件
解決策: エンテカビル 1-エピマーとエンテカビルの間の NLT 3.5。エンテカビルと 8 の間の NLT 2.0-ヒドロキシ エンテカビル、システム
適合性ソリューション
テーリング係数: エンテカビルの場合は 0.8-1.5、システム適合性ソリューション
相対標準偏差：NMT 1.5%、標準液
分析
サンプル：標準液とサンプル液
摂取されたエンテカビルの部分におけるエンテカビル (C12H15N5O3) の割合を計算します。
結果 = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × 100
ru = サンプル溶液からのエンテカビルのピーク応答
rs = 標準溶液からのエンテカビルのピーク応答
Cs = 標準溶液中の USP エンテカビル一水和物 RS の濃度 (mg/mL)
Cu = サンプル溶液中のエンテカビルの濃度 (mg/mL)
合格基準: 無水ベースで 98%-102%
不純物
• 有機不純物
溶液 A、溶液 B、移動相、システム適合性原液、システム適合性溶液、サンプル原液、サンプル溶液、およびクロマトグラフィー システム: アッセイの指示に従って進めます。
標準ストック溶液: アッセイからの標準溶液を使用します。
標準溶液: 標準ストック溶液からの溶液 A 中の USP エンテカビル一水和物 RS 0.2 μg/mL
システム適合性
サンプル：システム適合性溶液と標準溶液
[ 注-システム適合性ソリューション内のコンポーネントの相対的な保持時間については、表 2 を参照してください。]
適合性要件
解決策: エンテカビル 1-エピマーとエンテカビルの間の NLT 3.5。エンテカビルと 8 の間の NLT 2.0-ヒドロキシ エンテカビル、システム適合性ソリューション
テーリング係数: エンテカビルの場合は 0.8-1.5、システム適合性ソリューション
相対標準偏差：NMT 10.0%、標準液
分析
サンプル：サンプル溶液と標準溶液
採取されたエンテカビルの部分に含まれる各不純物の割合を計算します。
結果 = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × (1/F) × 100
ru = サンプル溶液からの各不純物のピーク応答
rs = 標準溶液からのエンテカビルのピーク応答
Cs = 標準溶液中の USP エンテカビル一水和物 RS の濃度 (mg/mL)
Cu = サンプル溶液中のエンテカビルの濃度 (mg/mL)
F = 相対応答係数 (表 2 を参照)
合格基準: 表 2 を参照してください。0.05% 未満のピークは無視してください。
表2
名前 相対保持時間 相対応答係数 合格基準、NMT (%)
フロエンテカビル a 0.73 1.0 0.1
エンテカビル 1-エピマー b 0.93 1.0 0.1
エンテカビル 3-エピマー c 0.96 1.0 0.1
エンテカビル 1.0 – -
8-ヒドロキシエンテカビル d 1.03 0.67 0.1
エンテカビル 4-エピマー e 1.08 1.0 0.1
8-メトキシエンテカビル f 1.27 0.67 0.1
4-ジメチルシリルエンテカビル g 1.84 1.0 0.1
エンテカビル関連化合物 A 3.41 – -
不特定の不純物 – 1.0 0.1
総不純物 i – - 0.3
a 9-[(3aS,4S,6S,6aR)-3a,6-ジヒドロキシヘキサヒドロ-1H-シクロペンタ[c]フラン-4-イル]グアニン。
b 9-[(1R,3R,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
c 9-[(1S,3S,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
d 8-ヒドロキシ-9-[(1S,3R,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
e 9-[(1S,3R,4R)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
f 8-メトキシ-9-[(1S,3R,4S)-4-ヒドロキシ-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
g 9-[(1S,3R,4S)-4-ヒドロキシジメチルシリル-3-(ヒドロキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
h 情報提供のみ。エンテカビル関連化合物 A の限界のテストで定量化されます。
i エンテカビル関連化合物 A および有機不純物の限界値のテストで見つかったすべての不純物の合計が含まれます。
• エンテカビル関連化合物 A の限界
溶液 A: 0.1% (v/v) トリフルオロ酢酸水溶液
溶液 B: アセトニトリル中の 0.1% (v/v) トリフルオロ酢酸
移動相: 表 3 を参照してください。グラジエント溶出時間は、滞留容積が 1 の HPLC システムで確立されます。
約1.0mL】
表3
時間 (分) 溶液 A (%) 溶液 B (%)
0 65 35
8 53 47
8.1 65 35
11 65 35
標準溶液: メタノール中の USP エンテカビル関連化合物 A RS 2 μg/mL
サンプル溶液: メタノール中のエンテカビル 1.0 mg/mL。必要に応じて超音波処理します。
クロマトグラフシステム
(クロマトグラフィー<621>、システムの適合性を参照。)
モード: LC
検出器: UV 254 nm
カラム: 4.6-mm × 5-cm; 5-µm パッキング L1
気温
オートサンプラー: 4°
コラム: 30°
流量: 2 mL/分
注入量：10μL
システム適合性
サンプル：標準液
適合性要件
テーリング係数: 0.8-1.5
相対標準偏差: NMT 3.0%
分析
サンプル：標準液とサンプル液
摂取したエンテカビルの一部に含まれるエンテカビル関連化合物 A の割合を計算します。
結果 = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × 100
ru = サンプル溶液からのエンテカビル関連化合物 A のピーク応答
rs = 標準溶液からのエンテカビル関連化合物 A のピーク応答
Cs = 標準溶液中の USP エンテカビル関連化合物 A RS の濃度 (mg/mL)
Cu = サンプル溶液中のエンテカビルの濃度 (mg/mL)
合格基準: NMT 0.1%
特定のテスト
• WATER DETERMINATION<921>、メソッド I、メソッド Ic: 5.5%-7.0%
• OPTICAL ROTATION<781S>、手順、特定の回転
サンプル溶液: ジメチルホルムアミドとメタノールの混合物 (50:50) 中のエンテカビル 10 mg/mL
合格基準: +24° ～ +30°
追加の要件
• 梱包と保管: 密閉した容器に入れ、光を避けて保管してください。室温で保管してください。
• USP 参照基準<11>
USP エンテカビル一水和物 RS
USP エンテカビル関連化合物 A RS
3-ベンジル-4-シリルエンテカビル;
9-[(1S,3R,4S)-4-ジメチルフェニルシリル-3-(ベンジルオキシメチル)-2-メチレンシクロペンチル]グアニン。
C27H31N5O2Si 485.65
USP エンテカビル システム適合性混合物 RS
混合物にはエンテカビル一水和物および以下の不純物が含まれています（他の不純物も存在する可能性があります）。
エンテカビル 1-エピマー。
8-ヒドロキシエンテカビル。
8-メトキシエンテカビル。

連絡先: アルビン・ファン博士

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