ペニシラミン
C5H11NO2S 149.21
d-バリン、3-メルカプト-。
d-3-メルカプトバリン [52-67-5]。
» ペニシラミンには、乾燥ベースで計算して、97.0 パーセント以上 102.0 パーセント以下の C5H11NO2S が含まれています。
梱包と保管-密閉容器に保管してください。
USP 参照規格<11>-
USP ペニシラミン RS
USP ペニシリン G カリウム RS
USP ペニシラミンジスルフィド RS
C10H20N2O4S2
識別-
A：赤外線吸収<197M>（300mg中50mg）。
Ｂ：１０ｍｇを５ｍＬの水に溶解し、１滴の５Ｎ水酸化ナトリウムと２０ｍｇのニンヒドリンを加える：直ちに青色または紫色が生じる。
C: 20 mg を 4 mL の水に溶解し、2 mL のリンタングステン酸溶液 (1/10) を加え、沸騰近くまで加熱します。すぐに深い青色が生じます。
比回転<781S>：60.5～64.5。
試験溶液: 1.0 N 水酸化ナトリウム中 50 mg/mL。
pH<791>:溶液中(1/100)で4.5〜5.5。
乾燥減量<731>-正確に秤量した約１００ｍｇを毛細管瓶に入れ、水銀柱５ｍｍ以下の真空下、６０℃で３時間乾燥させる。重量の減少は０．５％以下である。
強熱時残留物<281>: 0.1%以下。焦げた残留物を2 mLの硝酸と5滴の硫酸で湿らせる。
重金属、方法 II<231>: 0.002% 以下。
ペニシリン活性の限界-
pH 2.5 バッファー-リン酸一カリウム100gを水に溶かし、塩酸0.2mLを加え、水で1000mLに希釈し、混合する。必要に応じて、リン酸または 10 N 水酸化カリウムを使用して pH 2.5 に調整します。
標準的な準備-抗生物質-微生物アッセイ 81 の表 1 のペニシリン G の指示どおりに調製します。ただし、100 ペニシリン G 単位/mL および 0.005 ペニシリン G 単位/mL から 0.2 ペニシリン G 単位/mL の範囲の 6 つの試験希釈液を含む最終原液を調製し、標準の用量中央値 0.050 ペニシリン G 単位/mL を使用します。 mL。
試験の準備- 1.0gを水に溶かして18.0mLとし、この溶液9.0mLを分液器に移し、酢酸アミル20mLおよびpH2.5緩衝液1mLを加えて振り混ぜる。層を分離させ、水層を第 2 分離器に取り除き、酢酸アミル抽出物を第 1 分離器に保持します。水層のpHを確認し、3.0以上の場合は塩酸でpH2.5に調整し、酢酸アミル20mLで抽出する。水層を捨て、酢酸アミル抽出物を第一分離器に加える。合わせた酢酸アミル抽出物を１０ｍＬの希釈ｐＨ２．５緩衝液（１／１０）で洗浄し、水層を廃棄する。酢酸アミルを 10.0 mL の緩衝液 No. 1 で抽出します (「抗生物質 - 微生物アッセイ 81」の「培地および希釈剤」セクションの「リン酸緩衝液およびその他の溶液」を参照)。緩衝液抽出物の一部を試験溶液Ａとして使用する。抽出物の５μＬ部分に０．１ｍＬのペニシリナーゼ溶液を加え、３６〜３７．５℃で６０分間インキュベートする（試験溶液Ｂ）。
接種材料の調製-試験微生物として Micrococcus luteus (ATCC 9341) を使用し、標準の用量レベルの中央値で直径 17 mm ～ 21 mm の明確で鋭い阻害ゾーンを与える接種材料を使用して、抗生物質-微生物アッセイ 81 の指示に従って調製します。
手順-抗生物質 - 微生物アッセイ 81 のシリンダー - プレート法の指示に従って、ベース層に 10 mL の培地 1、シード層に接種した培地 4 4 mL を使用し、プレートを 29 ～ 31 でインキュベートします。ただし、各テスト プレート上で 2 つのシリンダーに試験溶液 A、2 つのシリンダーに試験溶液 B、および 2 つのシリンダーに標準用量の中央値を充填します。試験溶液 A が阻害ゾーンをもたらさない場合、試験はペニシリンについて陰性です。試験溶液 A が阻害ゾーンを生成し、試験溶液 B が生成しない場合は、ペニシリンが存在します。標準曲線からそのレベルを決定します。試験溶液 A の各 mL には 0.01 ペニシリン G ユニット以下が検出されます (1 g あたり 0.2 ペニシリン G ユニット)。
マーキュリー-
[注-ジチゾン酸水銀は感光性があります。このテストは暗い光の中で行ってください。]
ジチゾン原液- 40 mg のジチゾンを 1000 mL のクロロホルムに溶解します。
ジチゾン滴定剤- 30.0 mL のジチゾン原液をクロロホルムで 100.0 mL に希釈します。この溶液には 1 L あたり約 12 mg のジチゾンが含まれています。
標準溶液-塩化第二水銀 135.4 mg を 100 mL メスフラスコに移し、0.25 N 硫酸を加えて混合します。この溶液には、100 mL 中に 100 mg の水銀に相当する量が含まれています。
希釈標準液- 2 mL の標準溶液をピペットで 100 mL メスフラスコに移し、0.25 N 硫酸を加えて混合します。この溶液の各 mL には 20 μg の水銀が含まれています。
標準化-希釈標準液 1 mL を 250 mL セパレーターにピペットで移し、0.25 N 硫酸 100 mL、水 90 mL、ヒドロキシルアミン塩酸塩溶液 10 mL（1 in 5）を加えます。次に、エデト酸二ナトリウム溶液（1/50）1 mL、氷酢酸 1 mL、およびクロロホルム 5 mL を加え、1 分間振盪し、分離させ、クロロホルム層を廃棄します。この溶液に、１０ｍＬビュレットからジチゾン滴定剤を０．３ｍＬから０．５ｍＬずつ加えた。各添加後、混合物を 20 回振り、クロロホルム層を分離して廃棄します。振盪後もジチゾン滴定液の添加が緑色のままになるまで続けます。 20 を添加したジチゾン滴定液の mL 数で割ることにより、1 mL のジチゾン滴定液に相当する水銀の量 (μg) を計算します。
手順- 500 mg のペニシラミンを、数個のガラスビーズを含む 650 mL ケルダール フラスコに移し、フラスコを約 45 度の角度で傾け、フラスコの口に置いた小さな漏斗を通して 2.5 mL の硝酸を加えます。亜酸化窒素の煙が発生し、激しい反応が静まるまで (5 ～ 30 分間)、混合物を室温で放置します。漏斗を通して硫酸 2.5 mL を加え、最初は穏やかに加熱し、次に三酸化硫黄の煙が発生するまで加熱し、その後冷却します。硝酸 2.5 mL を注意深く加え、三酸化硫黄の煙が発生するまで再度加熱し、冷却します。硝酸による処理と加熱を繰り返し、その後冷却し、50 mL の水を慎重に加え、漏斗をすすぎ、すすぎ液をフラスコに集めます。漏斗を取り外し、溶液を約半分の容量（約 25 mL）まで煮詰め、室温まで冷却します。水とともに２５０ｍＬセパレーターに移し、水を加えて約５０ｍＬとする。 1 mL のエデト酸二ナトリウム溶液 (1/50) と 1 mL の氷酢酸を加え、最後のクロロホルム抽出液が無色になるまで少量のクロロホルムで抽出します。クロロホルム抽出液を捨て、0.25 N 硫酸 50 mL、水 90 mL、ヒドロキシルアミン塩酸塩溶液 10 mL (1:5) を加えます。ジチゾン滴定剤を 10-mL ビュレットから 0.3 mL ～ 0.5 mL ずつ加えます。各添加後、混合物を 20 回振り、クロロホルム層を分離して廃棄します。振盪後もジチゾン滴定液の添加が緑色のままになるまで続けます。存在する水銀の量を計算します。限界は 10 μg (0.002%) です。
ペニシラミンジスルフィドの限界-
希釈液、移動相、および分離溶液-アッセイの指示に従って調製します。
標準的な準備-正確に秤量した量の USP ペニシラミンジスルフィド RS を希釈剤に溶解して、1 mL あたり約 0.025 mg の既知の濃度を有する溶液を取得します。
試験の準備-アッセイ準備を使用します。
クロマトグラフシステム-アッセイの指示に従って進めてください。標準調製物をクロマトグラフし、手順の指示に従ってペニシラミンジスルフィドのピーク応答を記録します。反復注入の相対標準偏差は 2.0% 以下です。
手順- [注-ピーク応答が示されているピーク面積を使用します。] 等量 (約 20 µL) の標準調製物と試験調製物をクロマトグラフに別々に注入し、クロマトグラムを記録し、ペニシラミン ジスルフィド ピークの応答を測定します。次の式でペニシラミン中のペニシラミンジスルフィド (C10H20N2O4S2) の割合を計算します。
100(CS / CU)(rU / rS)
ここで、CS は標準製剤中の USP ペニシラミンジスルフィド RS の濃度 (mg/mL)、CU は試験製剤中のペニシラミンの濃度 (mg/mL)、rU および rS はそれぞれ試験製剤と標準製剤から得られたペニシラミンジスルフィドのピーク応答です。検出されるペニシラミンジスルフィドは 1.0% 以下です。
アッセイ-
希釈剤-エデト酸二ナトリウム1.0gを水に溶かして1000mLの溶液を作ります。
移動相-二塩基性リン酸ナトリウム 6.9 g と 1-ヘキサンスルホン酸ナトリウム 0.20 g を水に溶解して 1000 mL の溶液を作ります。リン酸で pH 3.0 ± 0.1 に調整し、孔径 1 μm 以上の適切なフィルターで濾過します。必要に応じて調整を行います (「クロマトグラフィー<621>」の「システム適合性」を参照)。
解決策- 1 mL あたり約 1 mg の USP ペニシラミン RS および 0.1 mg の USP ペニシラミンジスルフィド RS を含む希釈液溶液を調製します。
標準的な準備-正確に秤量した量の USP ペニシラミン RS を希釈剤に溶解して、1 mL あたり約 1.25 mg の濃度を有する溶液を取得します。
アッセイの準備-正確に秤量した約１２５ｍｇのペニシラミンを１００ｍＬのメスフラスコに移し、希釈剤に溶解して定容まで希釈し、混合する。
クロマトグラフシステム (クロマトグラフィー<621> を参照)-液体クロマトグラフには、210-nm 検出器および充填物 L1 を含む 3.9-mm × 30-cm カラムが装備されています。流量は毎分約 1.6 mL です。分離溶液をクロマトグラフし、手順の指示に従って応答を記録します。相対保持時間は、ペニシラミンの場合は約 0.7、ペニシラミンジスルフィドの場合は 1.0 で、ペニシラミンのピークとペニシラミンジスルフィドのピーク間の分離度 R は 3.0 以上です。標準調製物をクロマトグラフし、手順の指示に従って応答を記録します。反復注入の相対標準偏差は 1.0% 以下です。
手順- [注-ピーク応答が示されているピーク領域を使用してください。 ] 等量（約 20 μL）の標準調製物とアッセイ調製物をクロマトグラフに別々に注入し、クロマトグラムを記録し、主要ピークの応答を測定します。次の式でペニシラミンの一部に含まれるペニシラミン (C5H11NO2S) の量を mg 単位で計算します。
100℃(rU / rS)
ここで、C は標準調製物中の USP ペニシラミン RS の濃度 (mg/mL)、rU および rS はそれぞれアッセイ調製物と標準調製物から得られたペニシラミンのピーク応答です。