アレンドロン酸ナトリウム
C4H12NNaO7P2・3H2O 325.12
ホスホン酸、(4-アミノ-1-ヒドロキシブチリデン)ビス-、一ナトリウム塩、三水和物。
三水素 (4-アミノ-1-ヒドロキシブチリデン)ジホスホン酸ナトリウム、三水和物 [121268-17-5]。
» アレンドロン酸ナトリウムには、乾燥ベースで計算して、98.0 パーセント以上 102.0 パーセント以下の C4H12NNaO7P2 が含まれています。
梱包と保管-密閉容器に保存してください。室温で保管してください。
USP 参照規格<11>-
USP アレンドロン酸ナトリウム RS
識別-
A: 赤外線吸収<197M>。
B: ナトリウム<191> の燃焼試験の要件を満たしています。
乾燥減量<731>- 140℃、水銀柱 5 mm を超えない圧力で一定重量まで乾燥させます。重量の減少は 16.1% 以上、17.1% 以下です。
重金属、方法 III<231>: 0.001%。
クロマトグラフィー純度-
ホウ酸塩溶液および希釈剤-アッセイの指示に従って準備します。
緩衝液- ５．８８ｇのクエン酸ナトリウム二水和物および２．８４ｇの無水二塩基性リン酸ナトリウムを２Ｌメスフラスコに移し、水で定容まで希釈し、混合する。リン酸でｐＨ８に調整し、溶液を０．５μｍ以下の細孔度を有するフィルターに通す。
9-フルオレニルメチルクロロホルメート溶液- 1mLあたり約4mgの9-フルオレニルメチルクロロホルメートを含むアセトニトリル溶液を調製する。この溶液は使用直前に新鮮な状態で調製してください。
ソリューション A-濾過し、脱気した緩衝液とアセトニトリルの混合物 (17:3) を調製します。
ソリューション B-濾過し、脱気したアセトニトリルと緩衝液の混合物 (7:3) を調製します。
移動相-クロマトグラフィー システムの指示に従って、溶液 A と溶液 B のさまざまな混合物を使用します。必要に応じて調整を行います (「クロマトグラフィー<621>」の「システム適合性」を参照)。
標準原液-既知濃度約 0.6 mg/mL の USP アレンドロン酸ナトリウム RS の希釈剤溶液を調製します。
標準溶液- ５．０ｍＬの標準ストック溶液を、５ｍＬのホウ酸塩溶液を含む５０ｍＬのポリプロピレン製のネジ蓋付き遠心管に移す。 5 mLのアセトニトリルと5 mLの9-フルオレニルメチルクロロホルメート溶液を加え、45秒間振とうします。室温で 30 分間放置します。塩化メチレン 20 mL を加え、1 分間激しく振ります。 5～10分間遠心分離し、透明な上部水層の一部を使用します。
希釈標準液-標準ストック溶液の一部を希釈剤で希釈して、1 mL あたり約 0.6 μg の既知濃度の溶液を取得します。この溶液 5 mL を使用して、「50 - mL のポリプロピレン製のネジ付き遠心分離管に移す」ことから始めて、標準溶液の指示に従って作業を進めます。
試薬ブランク- 5.0-mL の希釈剤を使用して、「50-mL のポリプロピレン製、ネジ付き遠心分離管に移す」ことから始めて、標準溶液の指示に従って作業を進めます。
試験溶液-正確に秤量した約 30 mg のアレンドロン酸ナトリウムを 50 mL メスフラスコに移し、溶解して希釈剤で定容まで希釈し、混合します。 5.0 mL のこの溶液を使用して、「50 mL のポリプロピレン、ネジ付き遠心分離管に移す」ということから始めて、標準溶液の指示に従って作業を進めます。
クロマトグラフィー システム (クロマトグラフィー<621> を参照)-液体クロマトグラフには、266nm 検出器と充填物 L21 を含む 4.1-mm × 25-cm カラムが装備されています。流量は毎分約 1.8 mL です。カラム温度は約４５℃に維持される。クロマトグラフは次のようにプログラムされる。
時間 (分) A 液 (%) B 液 (%) 溶出
0 100 0 平衡
0-15 100→50 0→50 直線勾配
15-25 50→0 50→100 直線勾配
25-27 0→100 100→0 直線勾配
27-32 100 0 独裁的
標準溶液と希釈標準溶液をクロマトグラフし、手順の指示に従ってピーク応答を記録します。標準溶液のクロマトグラムにおけるメイン ピークのテーリング ファクターは 2.0 以下です。そして、希釈した標準溶液のクロマトグラムにおけるその軌跡のピークを３以上の信号比で検出できる。
手順-等量（約 20 µL）の試験溶液と試薬ブランクをクロマトグラフに別々に注入し、クロマトグラムを記録し、すべてのピークの応答を測定します。試薬ブランクから得られたピークに対応するピークはすべて無視してください。次の式でアレンドロン酸ナトリウムの部分に含まれる各不純物の割合を計算します。
100(里/rs)
ここで、ri は各不純物ピークの面積、rs はすべての不純物ピークとメイン ピークの合計です。個々の不純物は 0.1% 以下、不純物全体の 0.5% 以下しか検出されません。
アッセイ-
緩衝液- １４．７ｇのクエン酸ナトリウム二水和物および７．０５ｇの無水二塩基性リン酸ナトリウムを１Ｌのメスフラスコに移し、水で定容まで希釈し、混合し、リン酸でｐＨ８に調整する。
希釈剤- ２９．４ｇのクエン酸ナトリウム二水和物を１Ｌのメスフラスコ中で水に溶解し、水で定容し、混合する。
ホウ酸塩溶液- １Ｌのメスフラスコ中でホウ酸ナトリウム１９．１ｇを水に溶解し、水で定容し、混合する。
9-フルオレニルメチルクロロホルメート溶液- 1mLあたり約0.5mgの9-フルオレニルメチルクロロホルメートを含むアセトニトリル溶液を調製する。この溶液は使用直前に新鮮な状態で調製してください。
移動相-濾過し、脱気した緩衝液、アセトニトリル、メタノールの混合物 (70:25:5) を調製します。必要に応じて調整を行います (「クロマトグラフィー<621>」の「システム適合性」を参照)。
標準ストックの準備-既知濃度約 0.1 mg/mL の USP アレンドロン酸ナトリウム RS の希釈剤溶液を調製します。この溶液中の無水アレンドロン酸ナトリウムの濃度 CS を計算します。
標準的な準備- ５．０ｍＬの標準ストック調製物を、５ｍＬのホウ酸塩溶液を含む５０ｍＬのポリプロピレン製のネジ蓋付き遠心管に移す。 9-フルオレニルメチルクロロホルメート溶液 5 mL を加え、30 秒間振盪します。室温で 25 分間放置します。塩化メチレン 25 mL を加え、1 分間激しく振ります。 5〜10分間遠心分離します。透明な上部水層の一部を使用します。
試薬ブランク- 5.0 mL の希釈剤を使用して、「50-mL ポリプロピレン、ネジ-キャップ付き遠心分離管に移す」ことから始まる標準調製の指示に従って作業を進めます。
アッセイストックの準備-正確に秤量した約 25 mg のアレンドロン酸ナトリウムを 250 mL メスフラスコに移し、溶解し、希釈剤で定容まで希釈し、混合します。
アッセイの準備- 5.0 mL のアッセイストック調製物を使用して、「50-mL のポリプロピレン製、ネジ-キャップ付き遠心分離管に移す」ことから始めて、標準調製物の指示に従って作業を進めます。
クロマトグラフィー システム (クロマトグラフィー<621> を参照)-液体クロマトグラフには、266nm 検出器と充填物 L21 を含む 4.1-mm × 25-cm カラムが装備されています。流量は毎分約 1.2 mL です。カラム温度は約 35 ℃に維持します。標準調製物をクロマトグラフし、手順の指示に従ってピーク応答を記録します。カラム効率は 1500 理論段以上、テーリングファクターは 1.5 以下、反復注入の相対標準偏差は 2.0% 以下です。
手順 - 等量（約 10 µL）の標準調製物、アッセイ調製物、および試薬ブランクをクロマトグラフに個別に注入し、クロマトグラムを記録し、主要ピークの応答を測定します。次の式でアレンドロン酸ナトリウムの部分に含まれる C4H12NNaO7P2 の量を mg 単位で計算します。
DCS (rU / rS)
ここで、D はアッセイストック調製物の希釈係数です。 CS は標準ストック調製物で定義されているとおりです。 rU と rS は、それぞれアッセイ調製物と標準調製物から得られたアレンドロン酸のピーク面積応答です。